酶聯免疫試劑盒簡稱ELISA,是酶免疫測定技術中應用zui廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA(酶聯免疫吸附試驗)法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測大分子抗原,后者用于測定特異抗體。
酶聯免疫試劑盒的基本原理有三條:
(1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學活性;
(2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物,而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性;
(3)酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。由于ELISA法一方面是建立在抗原與抗體免疫學反應的基礎上,因而,具有特異性。而另一方面又由于酶標記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結合物,它可以催化底物分子發生反應,產生放大作用,正因為此種放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此,ELISA法是一種既敏感又特異的方法。